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服务编号:P15
名称:WB,IP,coIP,CHIP细胞组织通用裂解液
规格: 100ml
价格: 180 元
    
IP,coIP,CHIP细胞组织通用裂解液
 
       本产品有三种试剂,其中A液为coIP和CHIP裂解液,包含20mM Tris(pH7.5),150mM NaCl,1% NP-40,以及磷酸酶抑制剂sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,NaF,Na3VO4,和 AEBSF,E-64, pepstatin, aprotinin, bestanin, leupeptin等八种蛋白酶抑制剂。其中AEBSF为PMSF的稳定及安全替代品。您无需添加PMSF。A液为防止金属蛋白失活,不含EDTA。
        B液除A液组分外还增加了促进膜蛋白解离的试剂和EDTA,虽不影响蛋白的三级结构,但是会部分解离蛋白复合物,所以称B液为IP裂解添加剂。
        C液除B液的组分外,又进一步增加了双性表面活性剂和阴离子表面活性剂,以最大程度增加蛋白得率,所以称C液为WB裂解添加剂。
 
产品组分及保存:
细胞组织通用裂解液 A液        100ml
IP裂解添加剂 B液                   10ml
WB裂解添加剂 C液                 10ml
-20°C或-80°C保存,一年有效
 
使用说明:
根据实验需要单独使用A液,或者用A液与B液或C液以10:1进行混合形成IP或WB裂解工作液。
 
A,对于培养细胞样品:
1. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS洗一遍。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。冰浴15分钟使细胞更充分裂解。
   对于悬浮细胞:离心收集细胞。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。冰浴15分钟使细胞更充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
2. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
B,对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
3. 用玻璃匀浆器匀浆(或使用文渊阁开发的手持式电动组织匀浆机匀浆),直至充分裂解。
4. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
 
 
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