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文渊阁如何通过技术实现完美western的？

由上篇所述，完美western需要的几个要素简要概括为：

1，抗体质量要好。

2，样品中影响电泳的非蛋白高分子要少，样品不降解。

3，跑胶转膜要实现蛋白二硫键还原彻底，电泳条带高度压缩，转膜要接近100%转到膜上。

4，封闭液很关键，封闭要彻底，封闭液必须室温储存不变质，不可影响抗体及标记物活性，在这个前提下延长抗体孵育时间有助于抗体结合量的最大化，而提高温度可加速反应过程。

5，整个western要巧妙的参入质控手段。

6，发光液要高度稳定，持续发光，并且最重要的是灵敏度至少飞克级，这种发光液将比匹克级的发光液灵敏度可提高1000倍。

7，如选用膜上抗体剥离液，此产品一定不能伤抗原，还要把一二抗彻底去除，另外也不能增加背景。

8，漂洗也很重要，漂洗液务必不可变质长菌，漂洗时间不可过短。

9，整个系统必须做到高度稳定并且操作简单，每次实验结果都必须有高度可重复性。

文渊阁通过多年悉心研究，终于获得了接近完美的解决方案。由于本篇篇幅所限，此处只针对上述9个问题进行概括介绍，具体每种技术可在之后的文章中细述。

1，如果客户抗体质量不好，文渊阁通过8年的研发，设计出可以在16天制备高亲和力的抗体技术，客户只需提供抗原或蛋白质序列及500元总费用，另外文渊阁可通过表位区分纯化技术使得客户原有的抗体特异性显著提升。

2，文渊阁设计的组织细胞裂解液，一改RIPA的局限，使得组织可充分裂解，含有8种抑制剂，并使用PMSF的安全替代物，从而确保样品质量。如果样品中非蛋白成分过高，文渊阁开发的去杂质试剂可轻松将其去除，以减弱杂质对跑胶的影响。而抗干扰5分钟定量试剂盒，一改BCA法的复杂，类似BRADFORD操作，只需一步操作5分钟即可精确实现蛋白质定量。

3，文渊阁生物开发的TCEP上样缓冲液可更高效的还原二硫键，各种规格的预制胶通过机器灌制和配方改进，实现质量稳定，室温保存1年，蛋白条带压缩紧致，由于实现梯度锐变技术，从而实现100%的转膜效率。其电泳转膜通用缓冲液，电泳后的电泳缓冲液直接加入20%乙醇（非甲醇）即形成转膜缓冲液，湿转半干转通用，无需冰浴，50分钟实现各种蛋白完全转膜。文渊阁筛选提供NC膜，不同于一般的PVDF膜，可防止转移的蛋白穿透膜，也不同于一般的NC膜，可使膜上的蛋白结合的更牢固，便于膜上抗体高效剥离，剥离后的膜信噪比更高。

4，文渊阁提供的封闭液，适用于WESTERN，ELISA，IHC的封闭，对于Western只需要10分钟的封闭即可实现超低背景，（对ELISA无需封闭时间），除此之外，此封闭液室温操作保存不变质，并可有效的保存使用过的一二抗抗体活性，是理想的抗体稀释液和保存液。

5，文渊阁开发的双功能预染MARKER，即可作为普通的预染MARKER指示胶上蛋白分子量和转膜情况，又可质控WESTERN系统性能，当二抗，发光底物，或显影液正常时25kd产生信号，否则不产生信号。如果一二抗浓度过高时70kd产生信号。

6，文渊阁开发的超敏发光液，作为HRP的底物，其灵敏度超过millipore产品的16倍，thermo公司最高级别发光液灵敏度的4倍（达到15飞克级），而millipore的发光液信号会快速衰减，文渊阁超敏发光液可持续长时间发光。另外跟所有市面上的发光液都不同，文渊阁的发光液可以室温一年保存。发光液的稳定性和超敏性，配合封闭液的高效性，使得western获得绝佳灵敏度和信噪比。

7，文渊阁开发的膜上抗体高效剥离液，无气味，无表面活性剂，即使过夜剥离，膜上的蛋白包括预染marker依然清新可见。10分钟的剥离后，直接上二抗，您将看不到任何信号。一张膜可以反复做20张western，并且剥离后不用再封闭。

8，文渊阁开发的50xTBST缓冲液，每20ml加1升水即成工作液，使用方便，此缓冲液使用了安全的抑菌技术，不会长菌变质，TBST缓冲液变质会催化WESTERN膜本底上升。

9，文渊阁所有以上的western试剂稳定性能很强，除抗体外，所有试剂都是室温保存和使用。每次实验都会获得同样结果。文渊阁开发的WB曝光仪，800万像素，只需要一键启动，即可自动实现曝光度调整，多帧曝光，marker叠加，自动存档等功能。而文渊阁的超敏western服务，则是利用以上试剂配合模拟手工的自动化技术，也是只需一键启动，同时完成48张膜的多轮检测。

之后的文章将对以上9种技术进行细述。

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