ELISA,IP,coIP,CHIP细胞组织通用裂解液
 
         本产品包含三种组分A液，B液和C液，A液为coIP裂解液，裂解比较温和，包含20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及AEBSF,sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等八种抑制剂。其中AEBSF为PMSF的稳定及安全替代品。您无需添加PMSF。
         每900ul的A液加入100ul的B液，则提高了A液对膜蛋白的裂解强度，进一步增加了总裂解产物的得率，解离部分免疫复合物，但是蛋白本身构象维持天然构象，适合于免疫沉淀，所以称IP裂解液。
         每900ul的A液中加入100ul的C液，则极大程度的促进了所有蛋白的解离和裂解，使得总的裂解产物的得率获得最大，其裂解物蛋白部分发生构象改变，所以不适合进行IP，coIP，但由于其得率高，非常适合进行WB和CHIP实验，所以称之为WB裂解液
 
产品组分及保存：
A液  coIP裂解液  100ml
B液  IP裂解液添加剂  10ml
C液  WB裂解液添加剂  10ml
 -20℃保存，一年有效。
 
使用说明：
首先根据实验需求，配置coIP裂解液，IP裂解液，或WB裂解液，并准备冰盒。
 
A,对于培养细胞样品：
1. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS洗一遍。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。冰浴15分钟使细胞更充分裂解。
   对于悬浮细胞：离心收集细胞。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。冰浴15分钟使细胞更充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
2. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
  推荐使用文渊阁开发的样品纯化柱操作上述3-5分钟离心，可有效除去样品中影响定量，电泳及western拖带的粘性，团状和不溶物质，样品纯化柱在样品加入上样缓冲液后也可以使用。
 
B,对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
3. 用玻璃匀浆器匀浆（或使用文渊阁开发的手持式电动组织匀浆机匀浆），直至充分裂解。
4. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。