服务编号：H04

名称：ELISA无背景封闭及抗体稀释液

规格： 100ml

价格： 360 元

 

      文渊阁开发的ELISA无背景封闭及抗体稀释液，是传统BSA或奶粉封闭液的替代品，室温放置不会变质，只需5分钟室温封闭，即可实现无背景。此封闭液使得传统ELISA洗板流程得以简化，不必使用TWEEN20等表面活性剂，直接用去离子水漂洗即可。

      附送的TMB显色液是目前HRP显色底物中最安全和最灵敏的显色底物，一般的市售类似产品需要两管用前混合，文渊阁开发了一管式即用型TMB显色底物，并使其灵敏度相比传统产品进一步提高，无背景封闭液联合一管式TMB，可省去传统的硫酸酸化终止反应，在底物反应15-20分钟后，直接在OD595波长下进行读数。

 

ELISA无背景封闭及抗体稀释液       100ml

一管式TMB显色底物（附送）         20ml          

室温运输，  4℃保存一年

 

1，       将抗原用PBS稀释至5ug/ml, 在elisa板的每孔中加入200ul，室温放置2h,或4℃过夜，甩掉孔中包被抗原

2，       用去离子水将elisa孔注满后甩掉去离子水，

3，       重复步骤2,2次

4，       在EP管中加入90ul无背景封闭及抗体保存液，加入10ul一抗，用移液枪混匀。

5，       在elisa板中每孔加入200ul无背景封闭液，室温封闭5分钟。

6，       取ep管中的一抗100ul加入elisa板的第一孔

7，       用移液枪（100ul）反复洗吹第一孔中的液体20次进行混匀

8，       混匀后吸取第一孔液体100ul转移至第二孔中，如同步骤7一样进行混匀，混匀后吸100ul转移至第三孔，如此便形成了一抗从1:30的第一孔至之后孔的3倍倍比稀释，另外弃去最后一孔100ul

9，      将elisa板转移至37℃，孵育2h

10，     甩掉elisa板一抗，用去离子水将每孔注满后，甩掉残余水，如此反复洗6次

11，     将二抗按1:200到1:1000,稀释于无背景封闭及抗体稀释液，混匀,每孔加入180ul

12，     将elisa板转移至37℃，孵育1h

13，     重复步骤10，进行洗板

14，     每孔加入200ul一管式TMB显色底物，将elisa板转移至37℃，孵育15min-20min

15，     不必按传统方法进行硫酸酸化，可直接在OD595波长下进行读数。

 

     （不加一抗只加二抗的孔可作为阴性对照，阴性对照值的2倍可作为cutoff值，高于此值的稀释倍数即为elisa效价）