附：

一，不同品牌发光液发光时间及灵敏性测试：

将本公司羊抗兔二抗（0.5mg/ml)用PBS稀释20000倍后，4倍倍比稀释9次，各取1.5ul点于NC膜上（PALL,0.22um)，室温放置10min后，加入不同品牌发光底物，其中1为文渊阁本产品，2为millipore immobilon ECL,3为pierce SuperSignal West Dura, 4为pierce ECL底物。通过即刻曝光10秒和50秒来比较不同发光液灵敏性，之后将此含有发光底物的膜静置50分钟后再次检测，以比较不同发光液的发光持续时间，检测设备为制冷CCD（2x2像素合并）。

结果表明，文渊阁超敏发光液检测灵敏度远高于其他国际著名品牌（其中高于pierce ECL 16倍），并且支持长时间曝光，而millipore immobilon ECL和pierce ECL会随时间快速衰减，pierce SuperSignal West Dura也可比较持久发光，但灵敏度低于文渊阁本产品4倍。

欢迎广大客户一起重复此简单实验，不仅可掌控本实验室发光液质量，也可质控二抗质量。

二，不同发光液本底发光情况测试

剪去4小片NC膜（pall 0.22um),在其上直接滴加上述实验所用的四种发光液，发光液对应编号1,2,3,4也与上述实验一致，先利用外部反射光源对4片NC膜进行拍照，记录位置，再关掉外部光源利用制冷CCD拍照5分钟，获得以下结果。

结果表明，文渊阁超敏发光液（对应1号）发光本底远低于其他著名品牌（对应2,3,4号），可以推论，之前客户使用进口的灵敏度比较高的发光液，很容易产生整张膜高背景，如果排除封闭液质量不高，洗膜不彻底这两大因素，发光液本底高背景为一个原因。客户解决高背景的手段是稀释一二抗，但这是以牺牲检测灵敏度为代价的。

三，封闭液，漂洗液，发光液影响western背景的多因素测试

我们设计了客户可方便重复的简单实验，选取4小片NC膜（pall 0.22um),分别用5%光明牌脱脂奶粉TBST溶液封闭（下图左侧两膜）和自主开发的western低背景封闭及增敏稀释液进行封闭（下图右侧两膜），室温封闭30分钟后，直接加入HRP标记二抗（1:5000稀释），室温孵育1h,之后分别用传统的TBST缓冲液洗膜（下图上方两膜）和改进的TBST洗膜液洗膜（下图下侧两膜），漂洗两次，每次10分钟。之后加入millipore immobilon ECL进行曝光，曝光时间4.5min，曝光后4张膜用PBS快速漂洗两次，加入本超敏发光液，进行曝光，曝光30sec，从而获得以下结果。另外本实验中的传统TBST，5%奶粉溶液为新配置试剂，低背景封闭液（货号F00)及改进后的TBST缓冲液(货号F05)按说明书提示为室温长效保存试剂，故选取室温放置7个月并在非无菌环境下反复打开操作过的试剂。

结果表明，奶粉溶液封闭30min，配合使用两种灵敏度较高的发光液，将产生很强的背景信号，而低背景封闭液则可通过较短时间封闭高效降低背景，改进后的TBST缓冲液可在一定程度进一步降低背景。超敏发光液可在更短的时间内获得其他发光液长时间曝光才能获得的信号强度。