服务编号：H05

名称：高灵敏TMB可溶性显色液（HRP底物）

规格： 100ml

价格： 228 元

  TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物，无致癌性。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用2M H2SO4终止反应。加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度。通常的TMB显色试剂由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用不方便，并且也容易导致检测结果不稳定。本TMB显色液采用了单一组分TMB显色技术，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。

  本试剂盒最常用于ELISA检测，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。

  用于ELISA检测时，每个样品通常使用0.2毫升显色液，一个包装的本产品共可以检测约500个样品。

 

一管式TMB显色液(ELISA HRP显色用)   100ml

4℃避光保存，一年有效。

 

1. 对于ELSIA检测：

a. 参考ELISA试剂盒的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

b. 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入200微升TMB显色液。

c. 37°C孵育5-20分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。

d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入50微升2M H2SO4终止反应，随后在450nm测定吸光度。

2. 对于在96孔板内进行的其他适当检测 (例如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶)：

a. 直接在96孔板内每孔加入10-20微升样品。

b. 加入200微升TMB显色液。

c. 37°C孵育5-20分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。

d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入50微升2M H2SO4终止反应，随后在450nm测定吸光度。

 

1. 背景显色太深。

a. 如果背景(没有样品的对照)显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

b. 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2. 没有显色或显色太弱。

a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。

b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

c. 可以适当延长显色时间。

d. 如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。